产品信息
适用范围 | 试剂 |
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使用方法 | 【适用仪器】 显微镜、二氧化碳细胞培养箱、离心机。 【样本要求】 1. 新鲜抗凝外周血效果最佳,若样本无法立即接种,将样本放于2℃-8℃保存,并于5天内 接种,超过5天将影响培养效果。 2. 不得使用已产生凝血的外周血样本。 3. 避免使用溶血、乳穈状的外周血样本。 【检验方法】 1. 接种:每5ml培养基中加入0.4-0.6ml的外周血样本,轻轻摇晃培养瓶使样本与培养基充 分混合。 2. 培养:置于37℃,5% CO2培养箱中培养72小时。 3. 终止培养:向每个培养瓶中加入秋水仙素溶液,使终浓度为0.05-0.1μg/ml,轻轻摇匀后, 放入培养中静置2-3小时。 4. 收获细胞:将培养液转移至离心管中,1500rpm离心10分钟。 5. 低渗:弃去上清液,加入37℃预温的0.075 mol/L的KCl低渗液8-10ml,混匀使细胞重 新悬浮,37℃孵化25-35分钟。 6. 预固定:以冰醋酸:甲醇=1:3的比例配置固定液。每个离心管中加入1-2ml的固定液, 充分混匀后1500rpm离心10分钟。 7. 固定:弃去上清,每个离心管中加入8ml的固定液,充分混匀后静置20-30分钟,随后 1500rpm离心10分钟。 8. 再次固定:弃去上清,每个离心管中加入8ml的固定液,充分混匀后静置10分钟,随后 1500rpm离心10分钟。并重复该步骤一次。 9. 制片:将固定后的细胞悬液调至合适的浓度滴于用冰水预冷的载玻片上,每张载玻片上 滴2-3滴,可通过酒精灯外延5-6秒或者轻轻吹散。放入80℃烤箱中烤片2-3小时,或50℃ 过夜烤片。 10. 染色体分带:玻片从烤箱中取出,室温冷却后可进行G显带和R显带分型,吉姆萨染液染 色后显微镜下观察进行染色体核型分析。 【阳性判断值或者参考区间】 细胞倍增指数大于1.5 【检验结果的解释】 1. 固定液每次使用必须新鲜配制,否则将会形成酯类,形成背景较为明显,从而影响制片 效果; 2. 细胞培养时间、加入秋水仙素的量以及低渗操作时间等因素都会影响样品制备效果,需 要根据实际样本及实验条件进行适当调整。 【检验方法的局限性】 仅用于培养外周血淋巴细胞。 |
注意事项 | 1. 外周血淋巴细胞培养基短期内可放4-8℃保存,若长期储存,应放-20℃保存,不可反复 冻融。 2. 本产品只用于体外诊断,操作过程应避免污染;操作人员在检验时应做好防护,预防疾 病传播。 3. 试剂包装如有破损或滴漏,严禁使用。 4. 溶液应为澄清,如有沉淀物,严禁使用。 5. 禁止使用超出规定有效期的产品。 |
声明 | 仅用于科研使用,不能用于临床诊断和治疗。 |
保存条件 | 培养基应在-20℃避光储存,有效期为24个月。 |
产品详情
主要组成成分:RPMI-1640培养基、胎牛血清、抗生素、植物凝集素、纯化水。
检验原理:人外周血中的淋巴细胞在正常生理条件下处于G1期或G0期,很难观察到分裂相,不便于对 其进行遗传学分析。通过添加促有丝分裂剂,例如植物血凝素(PHA)对淋巴细胞进行刺激 后,可使淋巴细胞转化为淋巴母细胞,进入分裂期。经过短期培养,用秋水仙素进行处理即 可得到大量处于有丝分裂中期的细胞,可用于标本制备及后续的细胞遗传学分析,如染色体 核型分析、染色体畸变、淋巴细胞微核实验等。