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| ■ 制品内容E.coli HST16CR Competent Cells100 μl × 10pUC19 plasmid (0.1 ng/μl)10 μlSOC media*1 ml × 10 |
| *SOC Media: 2% Tryptone 0.5% Yeast extract 10 mM NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgSO410 mM MgCl2 20 mM Glucose |
| ■ 制品说明 |
| 感受态细胞是具有摄取外源DNA能力的受体菌，可摄取基因重组质粒等，是转化时的重要工具。Takara在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出的E. coli HST16CR Competent Cells。 E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）为基础，获得的ColE1 ori的复制相关基因 pcnB缺失的具有高转化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失，能够降低pUC系列载体的拷贝数，可有效用于难以克隆的含跨膜结构域蛋白质等、克隆基因对大肠杆菌生长有抑制作用的高拷贝载体克隆。 因为是以E. coli HST08 Premium Competent Cells为基础，缺失外源甲基化DNA的基因群(mrr -mcrBC-hsdRMS )和mcrA，因此可用于甲基化DNA的克隆、基因组文库构建和常规亚克隆。另外，使用pUC系列载体转化时，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选重组体。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
| ■ 细胞浓度 |
| 1-2×109 bacteria/ml |
| ■ Genotype |
| E. coli HST16 CR: ： F-, endA1 , supE44 , thi -1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ（ lacZYA - argF ）U169 , Δ ( mrr - hsdRMS - mcrBC ), ΔmcrA ,ΔpcnB, λ- |
| ■ 保存 |
| -80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
| ■ 质量标准 |
| [1] 转化效率 转化质粒载体时，转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于Amp+ 的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 plasmid时，确认含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。 |
| ■ 注意事项 |
| 1. 取出所需管数的感受态细胞后，搬运时请置于干冰/乙醇中。 |
| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD Code: 352059 或 352057，等)，但效率可能会降低。 |
| 3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。增加DNA量转化效率会降低。 |
| 4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，需要研讨适当的反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，请42℃加热60秒。 |
| 5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。 |
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。 |
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 M KOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。 |
| ·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，加水使终体积为1 L，高压灭菌。 |
| 6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行： 将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。 |
| 7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
| E.coliHST16CRCompetentCells | |||
| 品牌 | CodeNo. | 产品名称 | 包装量 |
| Takara | 9131 | E.coliHST16CRCompetentCells | 1Set(100μl×10支) |
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