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商品名称：Small RNA Cloning Kit
商品编号：SPU2021051358
上架时间：2022-01-05
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| ■ 制品内容 (10 次量) |
| □ Package1 (-20℃保存) RNase Inhibitor (40 U/μl)50 μl10X BAP Buffer200 μlAlkaline Phosphatase (BAP) (0.4 U/μl)20 μl0.1%BSA60 μl3’Adaptor*1*210 μlT4 RNA Ligation Buffer600 μlT4 RNA Ligase (40 U/μl)20 μl5X T4 PNK Buffer100 μlT4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) (10 U/μl)10 μl5’Adaptor*110 μl5X RT Buffer40 μldNTP Mixture (2.5 mM each)90 μlPCR-R & RT-Primer (50 pmol/μl)*1*320 μlRTase (RNaseH free) (200 U/μl)10 μl2X PCR Buffer250 μlPCR Primer F (50 pmol/μl)*110 μlTaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)10 μlControl RNA (5 pmol/μl)*410 μl□ Package2 (4℃保存) 3M Sodium Acetate (pH 5.2)200 μlDr.GenTLE Precipitation Carrier*580 μl2X B/W Buffer2.7 mlMagnosphere™ MS300/Streptavidin100 μlRNase free dH2O10 ml *1 3’Adaptor、5’Adaptor、PCR Primer F及PCR-R、RT-Primer上都带有Sse8387Ⅰ酶切位点，使用Sse8387Ⅰ酶切后的PCR产物可以与Pst I酶切的载体进行连接克隆。本试剂盒中不备有限制酶和克隆用载体，请另外准备。*2 3’Adaptor已用生物素标记。*3 PCR用的Reverse Primer，也可以作为反转录引物使用。*4 Control RNA是一条21mer、5’端磷酸化的RNA。*5 Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094)。 |
| ■ 制品说明 |
| 近几年的研究表明，在细胞内发现的RNA中有许多是非编码RNA，它们有着重要的功能，这些RNA被称为功能性RNA，其中倍受关注的是18-26 个碱基的低分子RNA，这些低分子RNA的功能有：① mRNA水平抑制基因表达。② 翻译水平抑制基因表达。克隆是分析小RNA的有效方法之一。由于小RNA与mRNA不同，它不具有PolyA tail，因此，在克隆时，需在小RNA的5’端和3’端分别加上RNA接头或者RNA/DNA杂合形式的接头，经RT-PCR后进行PCR。本试剂盒主要用于cDNA的合成和小RNA的克隆。试剂盒通过简单的磁珠吸附操作即可纯化小RNA反转录得到的cDNA，省去了在接头连接之后切胶回收等复杂操作步骤。扩增得到的cDNA可以直接用于TA克隆，或者利用接头中带有的酶切位点进行克隆。使用本试剂盒对小RNA (Small RNA) 进行克隆时的操作流程见图1。起始的Small RNA是由总RNA 经过电泳及切胶回收得到的。详细步骤如下：1. 将Small RNA进行BAP处理，5’端去磷酸化。2. 将带有生物素标记的RNA/DNA杂合形式的接头与BAP处理后的Small RNA的3’端进行连接。3. 用标记Streptoavidin的磁珠，回收带有生物素标记接头的Small RNA，然后进行5’端磷酸化反应。4. 将5’端连接上RNA/DNA嵌合的接头后，使用RT Primer和反转录酶进行反转录反应。5. 从磁珠上回收合成的cDNA后，进行PCR反应。6. PCR片段克隆。 |
| ■ 各种引物及Control RNA的碱基序列 |
| 名 称切 点酶 例PCR-R & RT-Primer 5’-GTCTCTAGCCTGCAGGATCGATG-3’反转录反应及PCR反应的Reverse引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。PCR-Primer F5’-AAAGATCCTGCAGGTGCGTCA-3’PCR反应的Forward引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。Control RNA 5’p-AGAUGACGGCAACUACAAGAC-3’用于Control反应。 |
| ■ small RNA克隆流程图 |
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| SmallRNACloningKit | |||
| 品牌 | CodeNo. | 产品名称 | 包装量 |
| Takara | RR065 | SmallRNACloningKit | 10次 |
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