ESCO艺思高生物安全柜/CO2培养箱/二氧化碳培养箱

2022-08-31 23:26:06

ESCO艺思高生物安全柜/CO2培养箱/二氧化碳培养箱

产品简介

中国YY 0569标准独立检测及认证证书

气流模式：100%全外排标配ULPA/HEPA超高效过滤器,针对0.12μm颗粒系可以达到99.999%截流效率

高品质高风量风机，自动风量风压平衡补偿 Esco最新型SentinelTM超大屏数显微电脑程控系统

背板及侧壁一体成型，圆弧角，操作腔四面负压环绕保护人体工程学5度倾斜角设计，增加操作舒适性舒适型宽体搁手架设计，降低工作疲劳强度

柜体外部IsocideTM抗菌涂层可抑制细菌在表面滋生前进气孔与操作台面为整块钢板一体成形，无接缝。

产品功能

柜体人体工程学倾斜式设计和无边框滑动前窗，提高了操作的舒适性及工作区操作的可视性
整个工作区左右侧壁和背板采用不锈钢一体成型设计，没有任何螺钉或接缝，边缘都经圆弧处理，便于清洁
搁手架被安装在生物安全柜工作台面进气隔栅的上方，提供舒适度的同时也防止进风气流被用户的手臂所阻挡
托盘式工作台面可以提起并取出，方便清洁及消毒操作
标配ULPA/HEPA超级高效过滤器，针对＞0.12微米颗粒具有99.999%的截流效率
所有腔体内的气流经过外排HEPA过滤器过滤后通过专用的管道系统100%排放到外部环境
Esco SentinelTM微电脑控制系统界面友好，安装在AB2柜体前部中间位置，实现柜体所有功能及参数的管理
紫外灯连锁设计保证了只有在前窗玻璃完全关闭状态下，紫外灯才能正常工作
柜体风机连锁安全系统保证当外排风机发生故障时，主风机迅速停机以保证操作者和环境的安全性
柜体通电后，风机自动进入预热状态，可将前次使用后操作室可能残留污染物排出
延迟关机功能可以通过设定自动进入，以保证可能残留的污染物被完全消除
Esco柜体外部表面均喷涂了IsoceideTM抗菌涂层，以抑制微生物或细菌等在柜体表面滋生
采用最先进的离心式外置转子风机，节能型外转子马达减少使用成本的同时，大大降低了噪音和振动水平

AB2-B系列生物安全柜AB2-5S1

本研究以心血管药物常见基因检测为代表，结合飞行时间质谱多基因检测平台特点，参照《CNAS-CL02-A009医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》进行性能验证研究，针对标本选择，位点选择，以及抗干扰实验方案进行设计：包括已测标本符合率、准确度、特异性、测定下限、精密度及气溶胶污染的抗干扰评价，首次建立了一个多基因多位点性能验证方案，为今后飞行时间质谱多基因检测平台性能验证规范和标准的形成奠定基础。

材料与方法

一、材料

1．标本：

选择2017年9月至2018年10月来自中国医学科学院阜外医院已测部分心血管药物相关基因位点的DNA标本998例和全血标本20例，入选标准：4度保存72 h以内的具有明确溯源性的全血标本；科室保存的具有明确溯源性冻存的DNA标本；研究者认为可以使用的标本，受试者年龄、性别不限。

排除标准：标本收集时间或信息不明确；试验操作中因失误导致标本量不足检测者；不符合标本采集、处理要求和保存期限的标本；重复入组的标本；标本信息不全或无法溯源的标本。本研究通过中国医学科学院阜外医院伦理委员会的批准（伦理编号：2019-1165）。

2．主要仪器：

NP968-C型核酸提取仪（天隆科技）；DP-TOF型飞行时间质谱检测系统（浙江迪谱诊断技术有限公司）、Nanodrop2000分光光度计（美国Thermo Fisher Scientific公司）、Veriti96PCR仪（美国Applied Biosystems公司）、Sorvall ST 16R Centrifuge离心机（美国Thermo FisherScientific公司）、Vortex-Genie2漩涡混合器（美国Scientific Industries公司）、eppendorf移液枪（德国eppendorf公司）、ESCO生物安全柜（新加坡艺思高公司）。

3．试剂：

DNA提取试剂：全血基因组DNA提取试剂盒（天隆科技）；飞行时间质谱检测试剂：iPLEX Pro Reagents（美国Agena Bioscience公司），检测心血管相关药物的11个基因共17个位点分别为：华法林：VKORC1（c.1173C>T rs9934438、c.-1639G>Ars9923231），CYP2C9（c.430C>Trs1799853、c.1075A>C rs1057910）；氯吡格雷：CYP2C19（c.681G>A rs4244285、c.636G>A rs4986893、c.-806C>Trs12248560）；硝酸甘油：ALDH2（c.1510G>Ars671）；高血压类药物：CYP2D6（c.100C>Trs1065852），ADRB1（c.1165G>Crs1801253），AGTR1（c.1166A>Crs5186），ACE（289 bpdeletion rs1799752）；叶酸：MTHFR（c.655C>T rs1801133）；他汀类：APOE（c.388T>C rs429358、c.526C>T rs7412），SLCO1B1（c.388A>G rs2306283、c.521T>C rs4149056）；Sanger测序试剂：GoTaq Hot Start Polymerase（美国promega公司），dNTP（翊圣生物）。

二、方法

（一）已测标本符合率

选择2017年9月至2018年10月来自中国医学科学院阜外医院已测部分心血管药物相关基因位点的DNA标本998例，用飞行时间质谱检测系统的默认参数和配套检测试剂进行检测，检测结果与已知位点结果进行比对，以已测结果为准，计算本检测结果与已检测结果的总符合率、各基因型的符合率。

（二）准确度评价

选择20份全血标本，提取DNA后，使用飞行时间质谱检测平台对心血管药物相关11个基因进行突变检测，加样量为2 μl。与Sanger测序法检测结果进行比对，通过kappa分析评价飞行时间质谱平台结果的准确性。

（三）特异性评价

从998份已测DNA标本中筛选10份标本（包含11个基因17个位点野生型），重复10次，进行基因检测。

（四）测定下限评价

从998份已测DNA标本中筛选4份标本（包含11个基因17个位点杂合型），用Nanodrop2000进行浓度检测。分别稀释至100、50、25、10、5、2.5、1、0.5、0.2、0.1 ng/μl。各梯度重复3次，评估每个梯度的基因位点检出情况。

（五）精密度评价

从998份已测DNA标本中筛选14份标本（包含11个基因17个位点所有常见基因型）进行检测，添加空白对照，每份标本重复2次。连续测定5天，评价每份标本位点的批间精密度；同一批标本重复测定10次，评价每份标本位点的批内精密度。

（六）抗干扰评价

从998份已测DNA标本中筛选代表性杂合型峰形为高低峰（APOEc.388T>C）和等高双峰（MTHFRc.655C>T）的野生和纯合突变标本各1份，将位点APOEc.388T>C和MTHFRc.655C>T为纯合突变标本DNA或PCR中间产物梯度稀释后，分别混入到同一位点为野生型DNA中，检测结果的抗干扰情况。

1．基因组DNA交叉污染：

分别将纯合突变型和野生型标本DNA按照1∶1、1∶4、1∶9、1∶19、1∶49、1∶99、1∶199的质量比混合（PCR体系总DNA质量20 ng），取2 μl加入反应体系上机扩增，重复3次，评价基因组DNA交叉污染对结果的影响。

2．PCR产物交叉污染：

将纯合突变型标本PCR产物（45循环后的产物大约1015拷贝/μl）梯度稀释至1013、1011、109、107、105、103、101拷贝/μl，取2 μl野生型基因组DNA标本和0.5μl梯度稀释好的突变型标本的PCR产物加入反应体系，重复3次，评价PCR产物交叉污染对结果影响；另外，直接对梯度稀释好的扩增产物进行扩增，评价尿嘧啶-N-糖基化酶（UNG）降解PCR产物能力。

3．消化产物（SAP）交叉污染：

将纯合突变型标本消化产物（45循环后的产物大约1015拷贝/μl）梯度稀释至1013、1011、109、107、105、103、101拷贝/μl，取2 μl野生型基因组DNA标本和0.5μl梯度稀释好的突变型标本的SAP产物加入反应体系，重复3次，评价SAP交叉污染对结果影响。

4．延伸产物交叉污染：

将纯合突变型标本延伸产物（45循环后的产物大约1015拷贝/μl）梯度稀释至1013、1011、109、107、105、103、101拷贝/μl，取2 μl野生型基因组DNA标本和0.5μl梯度稀释好的突变型标本的延伸产物加入反应体系，重复3次，评价延伸产物交叉污染对结果影响。

5．转板、撕膜交叉污染：

分别将纯合突变型和野生型最终反应体系产物按照1∶1、1∶4、1∶9、1∶19、1∶49、1∶99、1∶199的体积比混合，加入到384孔板中，重复3次，评价转板、撕膜交叉污染对结果的影响。

6．点样及检测过程中芯片基质间交叉污染：

将纯合突变型标本K2和野生型标本K1及阴性对照NTC排布于芯片相邻的基质点处，每24个点为一组，每组包括10个K1，10个K2和4个NTC，重复10次，评价芯片相邻基质间有无交叉污染。

结果

一、已测标本符合率

998份标本中，已测基因位点数为4 280个，将检测结果与已测结果对比，发现APOEc.388T>C位点有3个检测结果与已知结果不符，APOEc.526C>T位点有1个检测结果与已知结果不符，将以上4份不符合标本DNA使用飞行时间质谱平台复测，同时进行Sanger测序验证，结果均与已知结果一致。总符合率为99.91%（4 276/4 280），各基因位点符合率均大于99.5%，结果详见表1。

表1 飞行时间质谱平台检测998例已测标本基因位点符合率

二、准确度评价

使用飞行时间质谱平台和Sanger测序法对20例全血标本的心血管药物相关11个基因17个位点分别进行检测，以Sanger测序法检测的结果作为比对方法，飞行时间质谱平台检测作为实验方法，通过分析两者相关性，评价飞行时间质谱平台检测的准确性，共检测340个位点，其中突变型和野生型分别为162个和178个。结果如表2所示。飞行时间质谱平台与Sanger测序的结果完全一致，Kappa=1，说明两方法间具有良好的一致性。

表2 飞行时间质谱平台与Sanger测序法检测结果的一致性比较（位点数）

三、特异性评价

10份标本（包含11个基因17个位点野生型）检测结果表明，所有野生型标本基因位点结果均为野生型，特异性100%。

四、测定下限评价

4份标本（包含11个基因17个位点杂合型）检测结果表明，当浓度为0.1 ng/μl时，SLCO1B1 c.388A>G有2份标本未检出，ADRB1 c.1165G>C和CYP2C19 c.-806C>T各有1份标本检测错误，APOE c.526C>T有1份标本未检出，其他浓度检测正常；当浓度为0.2 ng/μl时，4份标本所有位点均能正确检出。此时DNA加入体积为2 μl，因此测定下限为0.4 ngDNA。

五、精密度评价

14份标本（包含11个基因17个位点所有常见基因型）检测结果显示，批内精密度和批间精密度均为100%，检测性能稳定。

六、抗干扰评价

反应体系对基因组和PCR各中间产物气溶胶有很强的抗干扰能力，UNG酶的降解能力为105拷贝/μl的气溶胶，芯片不同基质间无交叉污染，可以保证检测结果准确可靠。结果详见表3。

表3 飞行时间质谱多基因检测系统抗干扰评价结果

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