乙腈，特别是HPLC级的价格很高。但是文献或LC厂家所示的条件多数使用乙腈。这是为什么呢？今天我们就来谈一谈。

讲一个关于试剂等级方面的故事。A君以210mm测定麻黄中的麻黄碱时，与前任所取得数据相比噪声明显偏大，其认为自己分析水平差而灰心。后来偶尔问到前任，才知道应该使用HPLC级纯乙腈，而万万不该使用优级纯。

如下图1、2分别为市售HPLC纯与优级纯的乙腈和甲醇吸收光谱的对比。所谓HPLC级纯并非指绝对纯度高，而是指除去了具有吸收UV的杂质，且在规定的波长上将吸光度限制于规格值以内。在这四种试剂中，HPLC级纯的乙腈吸收最小(特别是在短波长时)。吸收越小的溶剂作为流动相，UV检测所产生的噪声越小，因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时HPLC级纯乙腈最适宜。另外，在UV检测中的梯度基线上也是HPLC级纯乙腈所产生的鬼峰少。虽然，其他与水相溶性高的有机溶剂有很多，但很难能找到比HPLC级纯乙腈吸收更小的。

另外，对于甲醇而言，虽然HPLC级纯和优级纯所得的光谱相差不大，但是优级纯不能保证吸光度，故有可能产生偏差。且价格也相差不大，所以请尽量使用HPLC级纯甲醇。

柱内承受的压力，根据有机溶剂的种类或混合比例不同而异。图3中表示的是水/乙腈，水/甲醇混合液的比例与输液压力的关系。甲醇与水混合，压力增高。而乙腈同样与水混合压力就低很多。因为乙腈水溶液在同样的流速下不会在柱内加载多余的压力。

从上述两项，可以确认使用乙腈的意义。那么，甲醇除了价格以外，还有哪些优点呢?下面不妨再来比较一下。

乙腈和甲醇分用同样的比例与水混合时，一般情况下，乙腈的洗脱能力强。特别是低混合比例时，从咖啡因和苯酚的洗脱来看，获得相同保留时间所需乙腈的比例，只需甲醇比例的一半以下即可(图4)。另一方面，100％有机溶剂或与此相接近时，从对胡萝卜素和胆甾醇来看常常都是甲醇的洗脱能力强(图5)。

● 混合比在50:1等较为特殊的“点”时，更容易出现配制误差，从而影响保留时间，或增加平衡的时间。乙腈遇到这种情况时，可考虑采用比例为10:1的甲醇溶液代替乙腈，如此这样操作更为方便。

● 当溶剂体积受温度影响较大时，不建议采用容器定量。而改为采用“称重”的方法，以此可使混合比的误差减小。

乙腈和甲醇在分离的选择性上不同。在图6的示例中，苯酚和苯甲酸的洗脱顺序改变(但水比例高时，用乙腈，也是苯酚先洗脱)。这是由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性溶剂，乙腈和四氢呋喃是非质子性溶剂)不同所致。

因此，在用乙腈类不能获得分离的选择性时，就用甲醇试一试。

像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等，用乙腈类时拖尾大，用甲醇类可抑制。这是由于：

① 有机溶剂分子的化学性质不同，因而对硅胶表面与目标成分间的作用(附着)有异；

② 对成分溶解能力的不同所致。

可是，一般情况下，聚合物类反相柱，与硅胶柱相比，更具有峰展宽的倾向。特别是用聚苯乙烯柱分析芳香族化合物等时常见。这在流动相是甲醇时非常显著，而用乙腈时不明显。为此，用聚合物类反相柱时建议采用乙腈类溶剂。这是因为乙腈容易使凝胶膨润。

离线配置混合流动相时，甲醇与水混合时发热、多余的溶解空气较易变为气泡而逸出(脱气容易)。而乙腈由于吸热冷却，随着慢慢回到室温，更容易产生气泡，所以要考虑脱气(加温搅拌，过滤膜、He脱气等)。

以上，我们对反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇进行了比较。粗略得出结论：

①优先考虑使用HPLC级纯乙腈；

②若选择性、峰形差时，试用HPLC级纯甲醇”。

但根据各种不同性质设计分析条件也是必要的。

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